短交替寡核苷酸：Wallace 36°C 低于最近邻 42.6°C12 聚体交替引物 ACGTACGTACGT（GC 50%）展示了两种方法分歧之处：Wallace 给出 2×6 + 4×6 = 36°C，而最近邻模型在 250 nM、100 mM Na+ 下给出 42.6°C——交替的 CG/GT 堆积步比粗糙的 2/4 规则所估计的更稳定。额外一课：该序列是真正的回文（等于自身的反向互补序列），因此模型还施加了 −1.4 cal/K 的自互补对称校正，并改用完整链浓度而非 Ct/4。无论选择哪种方法，工具都会同时报告两个数值，让简单规则的偏差一目了然。{"result":"Wallace Tm = 36°C (nearest-neighbor 42.6°C), GC 50%, 12 nt, self-complementary palindrome. Suggested Ta start ≈ 31°C (Tm − 5°C).","metadata":{"input":{"sequence":"ACGTACGTACGT","method":"wallace","primerConcentrationNm":250,"sodiumConcentrationMm":100},"result":{"length":12,"gcPercent":50,"selfComplementary":true,"wallaceTm":36,"nearestNeighborTm":42.6,"tm":36}}}
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